细胞培养基怎么使用 细胞培养基mem

植物体细胞培养基作

实验一、培养基母液的配制一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。二、实验原理 培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。而自然界的植物千万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用为广泛。说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。三、实验试剂与仪器设备1、品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、勺、超净作台、铁架、镊子等。四、实验内容（一）母液的配制MS培养基母液方案配制如下表：成分1L母液的用量(mg/L)每升培养基取用量(ml)备注大量元素(20X)NH4NO333000 50 KNO338000 KH2PO43400 MgSO4﹒7H2O7400 CaCl2660050单独配制铁盐(100X)FeSO4.7H2O278010 Na2-EDTA3730 微量元素（200X）KI166 5 H3BO31240 MnSO4.H2O3380 ZnSO4.7H2O1720 Na2MoO4.2H2O50 CuSO4.5H2O5 CoCL2.6H2O5 有机元素(100X)VB110 10 VB650 烟酸50 甘氨酸200 肌酸10000 具体配制步骤如下：1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中CaCl2单独配制。在加入母液时CaCl2应加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。五、实验结果经过大家的集体分工，很快就配制好了母液。母液澄清，无沉淀，说明配制成功，可以储存起来。六、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。3、品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、品的称量及定容都要准确。各种品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素 氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。 实验二、培养基的配制与灭菌一、各培养基配制1、香蕉培养基：诱导培养基：MS＋BA 3.0 mg／L继代培养基： MS＋BA 3.0 mg／L 生根培养基： MS＋NAA0.5mg／L 2、 烟草叶片培养基：诱导培养基： MS＋BA 1.0 mg／L继代培养基： MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L生根培养基： MS＋NAA 0.2 mg／L 3、柱花草培养基叶片愈伤组织诱导培养基： M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/ml继代培养基：M S+ BA4 mg/L+ NAA0.01mg/ml芽伸长培养基：M S+BA0.4+ NAA 0. 1mg/ml 4、木薯外植体培养基：诱导培养基：MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L继代培养基：MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L生根培养基：MS + NAA 0.02 mg/L 5、桉树外植体培养基：芽的诱导培养基：1／2 MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 1.0 mg／L芽的增殖培养基：MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 0.2 mg／L生根培养基： 1／2 MS＋NAA 0.2 mg／L 6、花生胚培养基：1／2 MS 7、玉米胚培养基：1／2 MS 8、水稻盾片培养基：水稻发芽培养基：MS诱导培养基：MS＋2，4-D 2.0 mg／L＋BA 1.0 mg／L分化培养基：MS＋BA 2.0 mg／L生根培养基：MS＋NAA 1.5 mg／L 9、自选材料—芦荟培养基芽诱导培养基： MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L继代增殖培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L生根培养的培养基配：1/2MS+NAA0.1mg/L 二、培养基的配制及消毒：（1）按照MS培养基的配方（以配制1LMS培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml，加钙盐50ml充分混匀。再加入30g食用白糖，加入适量的去离子水使总量将近1L，混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml量筒定容，向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。注意事项：1配制MS时，钙盐一定要加入；2调好PH值后再加卡拉胶（或琼脂）。（2）培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml，盖好瓶盖帖上标签。需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml容量瓶定容，向培养基中添加8g卡拉胶，混匀后进行分装，然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌（一般培养基用0.1MPa，121.5℃，15～30分钟可达到灭菌的目的）。灭菌好后取出冷却备用。（3）培养环境条件：培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每隔7天观察一次。 三、超净作台的消毒消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒，点燃酒精灯放于超净台右侧，再对实验工具进行灼烧灭菌，后放于架上冷却待用。并依次将实验中所用培养基瓶及所需试剂瓶进行消毒，置于超净台左侧，注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。 其实你应该把邮箱留下，这样给你发更好

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消毒方法大多是高温蒸汽消毒，需要注意的是培养基中的成分是否适合同一温度的消毒，如果不行的话，需要分别消毒再在无菌条件下混合。

母液的制作，你会配工作液的话，就是把工作液的浓度加高，就是母液了

液体，固体培养基采用湿热高温121℃，20min。也可采用滤菌作

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

细胞培养是一种常见的生物技术，其步骤主要包括以下几个方面：

常规准备：细胞培养基，胎牛血清，无菌作器具等；

细胞分离：将细胞悬浮液通过培养基离心分离并为单一细胞状态；

细胞计数：使用细胞计数板，显微镜等设备检测细胞浓度；

接种细胞：将细胞悬浮液加入预处理好的培养器皿中；

细胞培养及维护：放到合适的培养环境中，进行有利的生长处理（悬浮细胞与贴壁细胞的处理方式各有区别）

细胞检测及分裂：在一定时间内，对细胞进行检测，记录细胞数及细胞器发育情况；

细胞使用或保存：细胞可以在需要时被收获，进行进一步的科研工作，或保存在液氮罐中，以备后续使用。

进行细胞培养时，需要注意以下几点：

确保无菌作：细胞培养应在无菌环境下进行，必要时可使用生物安全柜进行作；

控制细胞温度：在适宜的器皿中提供恰当的温度，对于不同类型的细胞，温度和环境要求是不同的；

细胞培养基成分：细胞培养基中有多种成分，一些有组分具有强烈的耗竭作用，应及时更换培养基以供养细胞；

细胞处理方法：细胞处理时使用具有其细胞类型特异性的方法；

合适的接种密度：不同类型的细胞要求不同密度的接种，过高或过低的细胞密度均会对细胞的生长和分裂产生不良影响；

手套和口罩等保护作：需要保护自己以及细胞免于污染和交叉感染。

因此，在进行细胞培养时，需要细心、耐心和科学地作，这样才能够顺利地进行和成功地完成细胞培养工作。

细胞培养基介绍常用的溶液有哪些，细胞培养基介绍

细胞培养基的保存1.干粉,买了后一定要保存在4度.有人保存在-20度我认为没有必要.但4度是非常必要的.保证期是有提示的.2.配好的无血清培养基一定保存在4度,保存不要超过3个月.用时根据提示要加入谷胺酰胺.3.加入血清的培养基,保存在4度不要超过1个月,从时间太长,活性下降.当然稍微长点也不一定出问题.但是根据细胞而定;如果原代培养,新鲜,如果是肿瘤细胞,或仅维持传代就不太要紧.但是原则是越新越好. 可以到生物帮那里查找这样的信息啊,那里实验技术方法与技巧等都是蛮丰富的.